細胞株

ゲノム編集動物モデルは生物医学研究の強力なツールですが、細胞株モデルは作製の手軽さ、短い作製期間、低コストなど多い優位性があります。バイオサイトジェン社はプロジェクトの初期評価、細胞のトランスフェクション、クローニング、遺伝子の鑑定や表現型の解析析などすべての項目を含む細胞株ゲノム編集サービスを提供しています。

応用事例1：

ヒト骨肉腫U2OS細胞株のACTB（細胞骨格繊維状タンパク質）遺伝子コードの翻訳開始位置にEGFPを挿入し、ノックイン細胞株モデルを構築します。

βアクチンタンパク質はACTB遺伝子コードする細胞骨格タンパク質です。長さは 1kbのターゲティングベクターのホモロジーアームをそれぞれCRISPR-Cas9技術とEGE™技術を利用してターゲティングベクターに介在して、相同組換えを行われます。

LMNB1コードの核タンパク質Lamin-B1は同様のゲノム編集戦略が使用さました。

フローサイトメトリー法で解析した相同組み換えの効率は、つまりU2OS細胞株はCRISPR-Cas9でのるEGFP-ACTB遺伝子ノックイン効率は1.91%で、EGE技術で15.02%に達し、約8倍に向上しました。また、C6細胞株はEGE技術でのEGFP-LMNB1のノックイン効率は0.19％から3.6%になり、約19倍も向上しました。

応用事例2： 

   hESCとiPSCのゲノム編集

効率の高いEGE™システムは人工多能性幹細胞(iPSCs)の誘導とヒト胚性幹細胞（hESCs）ゲノム編集の理想的な選択肢です。

非統合プラスミド法を通じてヒト線維芽細胞から複数のiPS細胞初期化を誘導します。図Aは位相コントラスト画像を表示させています。図BはこのiPS細胞株での多能性マーカーであるOCT4，SSEA-4及びTRA-1-60の発現を示す同時に、正常な核型を備えています（図C）。免疫不全マウスには奇形腫を形成します（図D）。